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动物源性食品中喹诺酮类药物残留量测定的前处理方法

来源:坛墨质检标准物质中心 阅读数:313 时间:2020-06-01 10:52:06

喹诺酮类药物的危害及检测目的

     喹诺酮类药物主要通过阻断DNA回旋酶,造成细菌DNA不可逆损害来达到抗菌效果,它们具有抗菌、抗支原体、抗球虫等作用。因喹诺酮类药物对多种革兰氏阴性菌具有良好的杀菌作用,且价格低廉,是养殖中常用到的三大类药物之一,主要用于预防和治疗畜禽及鱼类的感染性病状。

     食品安全国家标准 食品中兽药最大残留限量(GB 31650-2019)中规定允许使用的喹诺酮类药物包括:达氟沙星、二氟沙星、恩诺沙星、氟甲喹、恶喹酸(奥索利酸)、沙拉沙星。虽然允许使用,但是也要规范用药,严格把控药物使用剂量、休药时间、用药对象等方面内容。因为如果喹诺酮类药物残留通过食物进入人体,会造成人类中毒、过敏,甚至致癌、致畸、致突变等严重后果,给消费者的健康带来潜在危害。

     本文阐述了如何将喹诺酮类药物从样品基质中分离提取出来,并经过净化后,转化成液质联用仪可以检测的形式。以提取、净化为重点,依据国标GB/T 21312-2007,为检测人员和相关领域研究人员提供一定的参考。


检测项目


喹诺酮类药物
应用范围


食品/动物源性食品/猪肉、猪肝、猪肾、牛奶、鸡蛋等
方法原理


用0.1 mol/L EDTA-Mcllvaine缓冲液(pH 4.0)提取样品中的喹诺酮类抗生素,经过滤和离心后,上清液经HLB固相萃取柱净化。高效液相色谱-质谱/质谱测定,用阴性样品基质加标外标法定量。
前处理仪器


电子天平:感量0.0001g和0.01g;组织匀浆机;旋涡混合器;冷冻离心机(最高转速大于10000r/min);聚丙烯离心管(50mL);酸度计(0.01);氮吹仪;固相萃取仪。
检测仪器


LC-MS/MS+ESI源

试样制备

1、动物肌肉和动物内脏

将现场采集的样品放入小型冷冻箱中运输到实验室,在-10 ℃以下保存,一周内进行处理。取适量新鲜或冷冻解冻的动物组织样品去筋、捣碎均匀。

2、牛奶

将现场采集的样品放入小型冷冻箱中运输到实验室,在-10 ℃以下保存,一周内进行处理。取适量新鲜或冷冻解冻的样品混合均匀。

3、鸡蛋

将现场采集的样品放入小型冷冻箱中运输到实验室,在-10 ℃以下保存,一周内进行处理。取适量新鲜的样品,去壳后混合均匀。


前处理方法

1、提取

01
动物肌肉组织、肝脏、肾

称取均质试样5.0g(精确到0.1g),置于50mL聚丙烯离心管中,加入20mL 0.1 mol/L EDTA-Mcllvaine缓冲溶液,1000r/min旋涡混合1min,超声提取10 min,10000 r/min离心5min(温度低于5℃),提取三次,合并上清液。


02
牛奶和鸡蛋


称取均质试样5.0g(精确到0.01g),置于50mL聚丙烯离心管中,加入40mL 0.1mol/L EDTA-Mcllvaine缓冲溶液溶解,1000r/min旋涡混合1min,超声提取10min,10000r/min离心10min(温度低于5 ℃),取上清液。

2、净化

HLB固相萃取柱(200mg, 6mL),使用时用6mL甲醇洗涤、6mL水活化。将提取液以2mL/min ~ 3mL/min的速度过柱,弃去滤液,用2mL5%甲醇水溶液淋洗,弃去淋洗液,将小柱抽干,再用6mL甲醇洗脱并收集洗脱液。洗脱液用氮气吹干,用1mL 0.2%甲酸水溶液溶解,1000r/min旋涡混合1 min,用于上机检测。


注意事项

1

浓度为1mg/mL的喹诺酮标准物质储备液可在-20℃冰箱中避光保存18个月。

2

该国标方法采用三次提取肉类样品沉淀物的方式保证回收率的准确性。

3

在固相萃取净化过程中,淋洗后一定挤干小柱,防止洗脱时水进入洗脱液,导致浓缩过程中氮气吹不干洗脱液,影响定量的准确性

4

由于该国标方法没有使用同位素内标来校正回收率,建议使用相应的空白样品基质提取液配制标准曲线。还可以购置相对应的同位素内标,配合液质仪检测使用。

5

配制 EDTA-Mcllvaine缓冲溶液时,建议配合使用磁力搅拌器,省时省力,使乙二胺四乙酸二钠完全溶解。

6

定容液涡旋混合复溶,有需要时可以超声30s,提高复溶效率。

7

由于喹诺酮类药物种类多,个别药物中文名称比较多(一药多名),现将国标中的标准物质中文别名总结如下表,以方便检测人员配制标准溶液。

动物源性食品中喹诺酮类药物残留量测定
前处理流程图







喹诺酮类药物信息表






坛墨质检对应标物