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挑战极性化合物分离难题,你开挂了吗?

来源: 赛默飞色谱与质谱中国 阅读数:155 时间:2021-08-17 09:14:03

极性化合物一直是液相色谱分析的难点,如何选择合适的分析色谱柱以及分析方法困扰着大多数的实验室分析人员。

核苷酸是一类由嘌呤碱或嘧啶碱、核糖或脱氧核糖以及磷酸三种物质组成的化合物,主要参与构成核酸,许多单核苷酸也具有多种重要的生物学功能,如与能量代谢有关的三磷酸腺苷(ATP)、脱氢辅酶等。核苷类药物,包括其衍生物是一类重要的抗癌药物,也可作为抗病毒药物来抑制病毒在人体内的生长繁殖。这些化合物属于大极性化合物,常规的反相色谱柱通常难以保留。而使用HILIC色谱柱会遇到同分异构体的挑战从而无法分离。



赛默飞黑科技

——Hypercarb 色谱柱

赛默飞黑科技——Hypercarb 色谱柱,填料为100%的多孔石墨化碳(PGC),球形全多孔颗粒。碳原子排列成六边形为骨架的多片层结构,没有任何其它的亚孔或键合相。基于这一特点,Hypercarb色谱柱具有不同于硅胶基质固定相的独特性质。Hypercarb的表面具有空间选择性,可以分离几何异构体及其它结构相近的化合物。Hypercarb对各种流动相溶剂都表现出极佳的稳定性,pH在1-14之间的流动相皆可用于分离,这使其可在一次运行中对各种极性的化合物进行分析。基于Hypercarb独特的疏水和电子云保留机理,它非常适合解决HPLC及LC/MS反相和HILIC应用中的“问题”分离,能够以超凡能力保留强极性化合物并分离结构性质接近的化合物。



小编通过两个案例分享,采用Hypercarb色谱柱,挑战极性化合物保留分离,如同带上开挂神器,在碱性流动相条件下,充分保留和分离核苷酸、阿糖胞苷及其含有同分异构体的磷酸化衍生物,对于其他类似结构的极性化合物分离具有极大的参考意义。

- No. -

01

Hypercarb用于5种核苷酸保留分离

仪器:Vanquish Duo UHPLC

色谱柱:Hypercarb,100x3mm,3um(P/N 35003-103030)

流动相:A:0.3%甲酸水,用氨水调pH=9;B: 乙腈

流 速:0.8 mL/min

进样量:5 μL

检测波长:UV 254 nm


图1  5种核苷酸分离效果



图2 婴幼儿配方全脂羊乳粉中核苷酸分离效果


图片

图3 5种核苷酸重复性谱图(n=3)

(点击查看大图)

使用Hypercarb色谱柱能有效分离全脂羊乳粉中5种核苷酸与其他杂质,结果可靠,可满足实验室检测需求。图3为5种核苷酸的重复性谱图,可以看到重复性良好,保留时间和峰面积RSD均<1%。

- No. -

02

Hypercarb用于阿糖胞苷及其磷酸化衍生物保留分离

仪器:Vanquish Duo UHPLC

色谱柱:Hypercarb,100x3mm,3um(P/N 35003-103030)

流动相:A:己胺 (5mM) ,加入DEA (0.4%, v/v), 用冰醋酸调pH=10;B: 乙腈/水 (1/1, v/v)

流 速:1 mL/min

进样量:20 μL

检测波长:UV 272 nm


图4 7种阿糖胞苷类化合物完美分离

(点击查看大图)

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图5 7种阿糖胞苷类化合物重复性谱图(n=6)


使用Hypercarb色谱柱保留和分离阿糖胞苷及其磷酸化衍生物,所有化合物均能基线分离,5号峰CTP与7号峰Ara-CTP这两种非对映异构体完美分离。7种阿糖胞苷类化合物在Hypercarb色谱柱上连续6针进样,重复性表现优异,保留时间和峰面积RSD<2%。

本方案开发基于LC-UV,能够分离颇具挑战的非对应异构体CTP与Ara-CTP,对于有低浓度分析要求的实验室,该方案可根据实际需求应用于LCMSMS。


今天的分享就到这里啦,大家是不是对Hypercarb保留分离极性化合物更有信心呢?想要获取更多信息,欢迎扫描下方二维码获取应用报告“Hypercarb色谱柱用于核苷酸类及其磷酸化衍生物的分析”,下期再会!