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蘑菇毒素之质谱分析

来源:岛津中国 阅读数:114 时间:2020-06-18 15:53:54

夏天是吃蘑菇的好季节。蘑菇种类繁多,一些食用菇味道鲜美,受到各地人们的喜爱,但是可不要采摘或吃到毒蘑菇而中毒。




毒蘑菇又称毒蕈,我国约有100种左右,分布广泛,引起人严重中毒的约有10种,毒性较强的主要有鹅膏肽类毒素(毒肽、鬼笔毒肽和毒伞肽)、鹅膏毒蝇碱、光盖伞素、鹿花毒素、奥来毒素等[1] ,属于生物碱类的毒物。


在我国鹅膏属中毒占误食野生蕈菌致死数的95%,且一年四季都有,以夏秋季为多见。民间也有各种鉴别毒蘑菇的方法,但总的看来这些方法并不可靠或者难以掌握。如何鉴别蘑菇是否有毒,或者误食中毒后如何快速、高灵敏度检测尿样或血样并进行有效的救治?这里就以鹅膏毒肽的质谱检测技术进行介绍。


蘑菇中的蘑菇毒素LCMSMS分析[2][3]


仪器:LCMS-8050

色谱柱:XBridge™ BEH C18 3.0 mmI.D.× 150 mm L., 2.5 μm

流动相:A相-0.03%氨水溶液;B相-甲醇

参考前处理:1 g 匀浆后的样品中加入15mL 0.5%盐酸溶液,涡旋后超声提取15 min,用0.5%的盐酸溶液补足至20 mL,涡旋后将混合物离心,取8 mL上清液到另一根干净试管中,加入2 mL二氯甲烷涡旋,之后离心2 min,取水相经HLB固相萃取柱净化、洗脱液用氮气吹干、复溶并涡旋混匀0.1 min,过滤膜后上机测试。

剧毒鹅膏菌中5种鹅膏毒肽色谱图

1 β-Amanitin(鹅膏毒素)
2 α-Amanitin(鹅膏毒素)

3 Phallacidin(类鬼笔毒肽)
4 γ-Amanitin(鹅膏毒素)

5 Phalloidin(鬼笔毒肽)


蘑菇毒素中毒样本在线SPE-LCMSMS分析


一旦误食有毒蘑菇造成中毒,因中毒的潜伏期较长,而且部分蘑菇中毒的症状一旦出现就迅速恶化,要及时到医院诊治,医院第一时间收集病人治疗前后的血尿和治疗过程中的血尿,收集保留可疑的毒蘑菇、吃剩的食物残渣、汤汁等。


鹅膏毒肽类毒蘑菇中毒应急检测分析,文献报导常用LCMSMS方法,样本提取后经SPE柱净化后再上机分析,这种方法进行血液病因鉴定的有效时间文献报导为20小时,因仪器灵敏度原因之后很难检测到,而本方法采用在线SPE-LCMSMS进行检测,即使40小时也可以检测血尿样本,灵敏度比文献高10-50倍。


在线SPE-LCMSMS分析生物样本中的蘑菇毒素系统示意图:

仪器:SPE-LCMS-8060

色谱柱:SPE柱:10mm MAYI柱,LC柱:100mm C18柱

流动相:甲醇/水

参考前处理:取0.5 mL血浆,加入1.5mL水(尿液直接2mL)和10 μL甲酸,混匀,上样到HLBSPE小柱(SPE小柱预先用3 mL甲醇和3 mL水活化),待样品溶液流干后用3 mL水淋洗除杂,抽干,2 mL甲醇洗脱被测物,氮气吹干,加水1mL溶解残渣,过膜后上机测定。


以尿中α-鹅膏毒素分析为例[4]

离线SPE LC-MSMS:

尿中1ng/mL,进样5uL,LOD:0.5ng/mL

尿中1ng/mL,进样50uL(因基体抑制,找不到峰)


在线SPE-LC-MSMS:


尿中1ng/mL进样50uL,LOD:0.02ng/mL

血浆中α-鹅膏毒素实际中毒样品分析结果


结论


一旦误食蘑菇发生中毒症状,采集患者尿样或血样进行蘑菇毒素的在线SPE-LCMSMS分析,方法灵敏度比文献报导的常规LCMSMS方法高10-50倍,且血液病因鉴定有效时间从20小时提升到40小时,结合临床症状和流行病学调查,汇总后对病人进行快速有效的救治提供了强大的技术支撑和数据保障,可以预见,未来在线SPE-LCMSMS还将在更多中毒检测中起到至关重要的作用。


温馨提示:

建议大家不要自行采摘、食用野生蘑菇,也不要在移动商贩处购买干或新鲜的蘑菇,以免发生食物中毒。


更多分析数据请登录岛津官网或与岛津相关工作人员联系获取。


参考文献


[1] 丁晓雯,柳春红.食品安全学:中国农业大学出版社,2011

[2] 岛津应用数据集LCMSMS-372

[3] 徐小民,张京顺,蔡增轩,张晶,黄百芬,许娇娇,陈苘.在线液相色谱-二极管阵列检测器-串联质谱法检测野生菌中鹅膏毒肽和鬼笔毒肽,色谱,2017,35(6)613-619

[4] Xiao-min Xu, et al. Screening of polypeptide toxins asadulteration markers in the food

containing wild edible mushroom by liquid chromatography-triplequadrupole mass spectrometry,Food Control 71 (2017) 393-402