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新型反相/强阴离子交换混合模式材料用于磷酸化肽富集
董立君 , 张丽媛 , 彭金咏 , 董佩佩 , 王丽莉 , 张利娟 , 候晓林 , 赵艳艳
doi:  10.11895/j.issn.0253-3820.160415
建立了新型反相/强阴离子交换混合模式材料(C18/SAX)的磷酸化肽富集方法。考察了流动相组成(乙腈浓度、甲酸浓度、缓冲盐浓度)对酪蛋白(α-Casein)酶解液中磷酸化肽分离选择性的影响。实验结果表明,磷酸化肽在C18/SAX上的保留行为受疏水和离子交换作用力的共同调控,单磷酸化肽先于多磷酸化肽从材料上洗脱出来。随着甲酸浓度增加,磷酸化肽的保留减弱;随着盐浓度增加,磷酸化肽保留变小。采用优化后的流动相,建立以20% ACN/20 mmol/L NH4Ac作为上样溶液,20% ACN/0.1% FA和50% ACN/100 mmol/L NH4Ac/2% FA分别作为洗脱液分段洗脱单、多磷酸化肽的方法。以α-Casein和人血清白蛋白(HSA)酶解液的混合溶液(1:20,n/n)作为模拟样品,实现了单、多磷酸化肽的同时富集和分段洗脱,分别检测到4条单磷酸化肽和14条多磷酸化肽的信号。将本方法用于牛奶中的磷酸化肽检测,共鉴定到4条单磷酸化肽和8条多磷酸化肽信号。结果表明,本富集方法选择性高,有良好的应用前景。
关键词: 磷酸化肽, 反相/强阴离子交换材料, 富集
水溶性硼酸亲和富集材料的制备及基于酶联免疫吸附法检测人肝微粒体糖蛋白的应用
李甜甜 , 张丽媛 , 于振龙 , 马骁驰 , 邓卅
doi:  10.11895/j.issn.0253-3820.170251
生物样品中的糖蛋白丰度低,且在检测中易受到其它非糖蛋白的抑制和干扰,需在分析检测前对糖蛋白进行富集,但常规的基于固相材料的糖蛋白富集方法不易与生物技术中最经典的酶联免疫吸附法(ELISA)兼容。本研究以树枝状聚合物PAMAM 4.0为载体,结合硼酸亲和技术,制备了新型水溶性硼酸亲和富集材料(DBC),并将其应用于基于ELISA的人肝微粒体中糖蛋白的检测。采用标准糖蛋白对DBC富集条件进行优化,然后考察其灵敏度和抗干扰能力,将优化后的方法应用于复杂样品人肝微粒体糖蛋白富集。结果表明,DBC对糖蛋白的富集选择性可高达100000倍,可将糖蛋白的富集信号提高100倍。以DBC为富集材料,与ELISA分析技术相结合,只需一步简单的孵育,即可实现生物样品中糖蛋白的高灵敏度、高选择性检测,为疾病相关的糖蛋白组学研究提供了一种有效的检测手段。
关键词: 糖蛋白, 硼酸, 树枝状聚合物, 富集