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基于DNA杂交链式反应和杂交空位的无标记荧光检测DNA研究
徐杰 , 林滨 , 王亚 , 徐志爱 , 程桂英 , 张文
doi:  10.11895/j.issn.0253-3820.181142
基于DNA杂交链式反应(Hybridization chain reaction,HCR)的信号放大策略,通过在参与HCR反应的发夹型DNA中设计一个特殊碱基,HCR反应后,该碱基对位出现杂交空位,利用杂交空位与荧光小分子(2-Amino-5,6,7-trimethyl-1,8-naphthyridine,ATMND)特异性结合产生的荧光淬灭效应,构建了一种无标记、无酶、灵敏的DNA检测体系。利用凝胶电泳和原子力显微镜等对目标DNA引发两个发夹型DNA交替自组装形成的超级长链进行了表征。通过对杂交盐浓度和ATMND浓度等条件的优化,获得了满意结果。相比于未利用此放大信号策略的分析方法,灵敏度提高了两个数量级,目标DNA浓度在5.0~72.7 nmol/L浓度范围内与荧光比值(F/F0)呈现良好的线性关系,检出限为2.0 nmol/L。
关键词: 杂交链式反应, 杂交空位, 荧光, 信号放大, 无标记
阳离子化荧光金纳米簇的合成及siRNA递送研究
胡献丽 , 朱琳嶺 , 李苓菱 , 徐志爱 , 张文
doi:  10.19756/j.issn.0253-3820.201088
基于Small interfering RNA(siRNA)的RNA干扰(RNA interference,RNAi)策略已经成为生物医学研究的常规手段,而通常采用的基于聚阳离子或阳离子磷脂的siRNA递送系统递送效率低、细胞毒性高,而且缺少示踪功能,严重制约了siRNA药物临床转化。为克服传统siRNA递送载体的不足,本研究发展了一种新型siRNA荧光纳米递送系统。首先利用牛血清白蛋白为模板,通过生物矿化策略合成具有近红外荧光发射的金纳米簇(Gold nanocluster,GN),利用乙二胺(Ethylenediamine,EDA)或N,N-二甲基乙二胺(N,N'-Dimethylethylenediamine,DMA)对GN进行共价修饰,得到阳离子化金纳米簇(Cationic gold nanocluster,CGN),同时实现siRNA高效递送和荧光示踪。然后,以表达绿色荧光蛋白(Green fluorescence protein,GFP)的肺癌A549细胞(A549-GFP)为细胞模型,验证了CGN可实现siRNA高效递送,并沉默A549-GFP细胞的GFP表达;进一步利用共聚焦激光扫描显微镜实现了GN细胞分布的荧光示踪。本研究结果表明,CGN有望用作siRNA递送载体和示踪探针。
关键词: siRNA, 金纳米簇, 阳离子化, 荧光示踪, 递送载体