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基于萘酰亚胺的生物硫醇探针的合成及对含硫醇氨基酸的检测
郭靖 , 刘庆文 , 杜建时 , 孔祥怡 , 宋岩 , 杨清彪 , 赵晴 , 李耀先
doi:  10.11895/j.issn.0253-3820.170319
合成了以4-羟基萘酰亚胺为荧光团,2,4-二硝基苯磺酰氧基为特异性识别基团的生物硫醇探针4-(2,4-二硝基苯磺酰氧基)-正丁基-1,8-萘酰亚胺(DNSBN)。吸收光谱和荧光光谱结果表明,DNSBN对半胱氨酸(Cys)、同型半胱氨酸(Hcy)和谷胱甘肽(GSH)3种生物硫醇分子具有高效的检测识别能力,不受其它17种天然氨基酸的干扰。同时,通过荧光滴定实验证实了此探针是一种比率型探针,555 nm处的荧光强度与溶液中的生物硫醇分子浓度在0~20 μmol/L范围内呈良好的线性关系,对Cys、Hcy和GSH的检出限(3σ)分别为25.9、92.0和77.9 nmol/L。而吸收光谱、荧光光谱和质谱表征数据显示,生物硫醇与2,4-二硝基苯磺酸酯发生亲核取代反应并导致磺酸酯的分解。随着识别基团的解离,探针分子的d-PeT(donor-excited photoinduced electron transfer)效应被解除,并出现非常明显的比色与荧光变化。HeLa细胞成像实验表明,探针DNSBN具有良好的生物相容性,能够对细胞外源性生物硫醇分子进行检测。
关键词: 荧光探针, 萘酰亚胺, 半胱氨酸, 同型半胱氨酸, 谷胱甘肽
阿尔兹海默症血清多肽组生物标志物研究
孔祥怡 , 杜建时 , 马明 , 徐金玲 , 李水明 , 王勇 , 赵晴
doi:  10.11895/j.issn.0253-3820.170248
采用个体样品单独分析的方式分析,比较9个健康对照者、10个阿尔兹海默症(Alzheimer's disease,AD)患者和12个认知功能障碍(Mild cognitive impairment,MCI)患者的血清多肽组分析结果,以寻找潜在的AD病生物标志物。结果表明,高强度的α-2-巨球蛋白肽段VGFYESDVMGR与AD病晚期阶段密切相关,而载脂蛋白C-Ⅲ、组蛋白H1.2和组蛋白H1.4的大量降解,则与中早期AD和认知功能障碍相关联;载脂蛋白C-Ⅲ和组蛋白H1的降解肽段具有明显的阶梯序列特征,但在不同样本中的分布具有一定偶然性。AD病发展的晚期与中早期的血清多肽组特征不同,这4种蛋白质的降解有可能成为AD病潜在的生物标志物。研究结果也证明了,归属于纤维蛋白原α链、胸腺素β-4和斑联蛋白等蛋白质的肽段是所有血清样本中的优势肽段。本研究提出了利用血清多肽组学方法辅助诊断AD病的方法,为临床大规模验证提供了依据和参考。
关键词: 多肽组, 生物标志物, 血清, 阿尔兹海默症, 认知功能障碍