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酶级联反应放大策略用于灵敏检测酸性磷酸酶
李苹 , 董玉明 , 王光丽
doi:  10.11895/j.issn.0253-3820.181038
构建了一个新型酶级联反应体系用于灵敏检测酸性磷酸酶(ACP)。焦磷酸根离子(PPi)与Fe3+有很强的结合作用,阻碍了具有模拟过氧化物酶活性的普鲁士蓝纳米粒子(PBNPs)的生成。ACP可将底物PPi水解为PO43-,从而释放出Fe3+。释放的Fe3+与亚铁氰化钾(K4[Fe(CN)6])形成PBNPs,PBNPs可以催化过氧化氢(H2O2)产生羟基自由基(·OH),进而催化氧化特征底物3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB),使体系产生明显的颜色变化,同时伴随吸光度的变化。基于上述原理,构建了一种灵敏检测ACP的方法。结果表明,在3~20 U/L的浓度范围内,氧化TMB(oxTMB)的吸光度与ACP浓度呈较好的线性关系,检出限为0.8 U/L。本研究中,通过天然酶的催化反应产生纳米材料模拟酶构建的酶级联催化反应体系具有高效的信号放大作用,有望在生物传感领域发挥重要作用。
关键词: 酶级联反应, 普鲁士蓝纳米粒子, 模拟过氧化物酶, 酸性磷酸酶
石墨相氮化碳光诱导活化辣根过氧化物酶及其比色免疫分析应用
张岚 , 李小琴 , 王光丽
doi:  10.19756/j.issn.0253-3820.201065
基于石墨相氮化碳(g-C3N4)在可见光(λ≥400 nm)照射下可激活辣根过氧化物酶(HRP),使HRP能够催化氧化特征底物3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB),设计了一种新型夹心型免疫传感器,用于高灵敏检测甲胎蛋白(AFP)。此夹心型免疫传感器利用附着于微孔板上的一抗(Ab1)捕获目标物AFP,然后与HRP和二抗(Ab2)共同标记的金纳米颗粒(Ab2-AuNPs-HRP)反应,并结合酰胺放大技术(TSA),增大表面固定的HRP的量,实现信号放大。加入g-C3N4后,在可见光照射下,HRP的活性被激发,TMB被氧化后的信号(即652 nm处的吸光度)与AFP的浓度在0.5 pg/mL~0.1 μg/mL范围内呈线性关系,检出限(LOD,S/N=3)为0.17 pg/mL。 本研究构建的新型免疫传感器具有灵敏度高、选择性好、使用方便等优点,在实际样品测定中具有潜在的应用价值。
关键词: 石墨相氮化碳, 辣根过氧化物酶, 活化, 免疫分析