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基于核酸碱基猝灭荧光团的核酸适配体传感器检测赭曲霉毒素A
曲瑶 , 张亚旗 , 肖光 , 杨成
doi:  10.19756/j.issn.0253-3820.201260
赭曲霉毒素A(OTA)是农产品中常见的霉菌毒素,对人和动物具有较强的毒性,以及致畸、致癌、致突变作用,因此,建立简单、快速、低成本、高灵敏的OTA检测方法是即时农产品质量监测和保障消费者安全的有效手段。本研究以鸟嘌呤碱基为猝灭剂,以单标记荧光素(FAM)的寡聚核酸为探针,基于核酸适配体构建了生物传感器,用于检测葡萄酒中的OTA。鸟嘌呤是具有多个给电子基团的稠杂环化合物,电子密度较大,在核酸碱基中氧化电位最低,最容易被氧化,作为电子供体可通过光诱导电子转移过程猝灭荧光基团。OTA不存在时,标记有FAM的寡聚核酸探针与OTA核酸适配体杂交,FAM靠近鸟嘌呤荧光被猝灭;样品中存在OTA时,其与核酸适配体特异性结合,形成四链体结构,抑制寡聚核酸探针与适配体结合,FAM的荧光得以恢复,通过FAM荧光强度的恢复率实现对OTA的检测。本方法检测OTA的线性范围为0.67~7.80 nmol/L,检出限为0.67 nmol/L(0.27 μg/kg,S/N=3)。实际红酒样品中OTA的加标回收率为92.4%~100.9%。与纳米金、单壁碳纳米管、氧化石墨烯等纳米材料为猝灭剂的方法相比,本方法具有检测成本低、选择性好、检出限低等优点。
关键词: 核酸碱基, 荧光猝灭, 核酸适配体, 单标记荧光团, 赭曲霉毒素A