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基因编辑阳性细胞的富集报告系统
张力弦 , 王启扉 , 曹杨 , 叶承宇 , 陈智洋 , 徐启杰 , 邹秉杰 , 宋沁馨 , 周国华
doi:  10.19756/j.issn.0253-3820.191322
基因编辑技术已成为医学生物学研究的重要工具,将不同基因快速高效地富集到基因编辑阳性细胞并进行针对性研究是促进基因编辑技术发展的关键。近年来,基于非同源末端接合、同源直接修复、单链退火、倒位重排等基因组修复机制,研究者利用荧光蛋白或抗性标签基因修复后表达的原理,建立了多种可用于基因编辑阳性细胞筛选与富集的报告系统。富集后的细胞采用T7E1酶切法或测序技术进行突变分析,呈现显著降低的背景信号和增加的突变比例。此类报告系统有利于基因编辑效果的表征。此外,分选后的阳性细胞可继续培养,在突变细胞系构建及突变细胞功能研究等领域具有良好的发展前景。本文对这些报告系统的设计原理与应用进行了总结,以期为建立更加完善的基因编辑评价系统提供参考。
关键词: 基因编辑, 修复机制, 细胞富集, 报告系统, 评述
基于核酸侵入反应偶联PCR的粪便样本基因甲基化定量分析方法及用于结直肠癌无创筛查
刘琳琳 , 齐谢敏 , 邹秉杰 , 宋沁馨 , 周国华
doi:  10.11895/j.issn.0253-3820.181117
从粪便中检测BMP3基因甲基化水平可实现对结直肠癌的无创筛查,但对检测方法的灵敏度与特异性要求很高。本研究将核酸侵入反应与实时荧光聚合酶链式反应(PCR)偶联,建立了BMP3基因甲基化检测方法,以ACTB基因作为参比基因,通过优化反应体系中探针浓度、Flap核酸内切酶与Taq酶用量,提高BMP3目标基因与ACTB参比基因的扩增效率至接近100%,实现了利用ΔCT法进行BMP3基因甲基化水平的相对定量,可对低至10 copies的甲基化BMP3基因进行检测,并可从非甲基化模板中准确定量0.01%的甲基化模板,非甲基化模板不产生非特异性信号,表明本方法具有极高的灵敏度与良好的特异性。将本方法用于16例结直肠癌患者、7例结直肠腺瘤患者及19例健康人粪便样本中BMP3基因甲基化检测,结果表明,有5例结直肠癌患者的粪便样本检出BMP3基因甲基化,2例结直肠腺瘤患者的粪便样本检出BMP3甲基化,健康人的粪便样本均没有检出甲基化,表明本方法可用于检测粪便样本中基因的甲基化水平,为临床开展基于粪便中基因甲基化检测的无创结直肠癌筛查提供了新方法。
关键词: DNA甲基化, 实时荧光聚合酶链式反应, 核酸侵入反应, 结直肠癌, 粪便DNA
新型冠状病毒SARS-CoV-2核酸检测技术平台的研究进展
盛楠 , 马雪萍 , 逄淑云 , 宋沁馨 , 邹秉杰 , 周国华
doi:  10.19756/j.issn.0253-3820.201259
新型冠状病毒(SARS-CoV-2)已蔓延至全球,严重威胁人类的健康。SARS-CoV-2传染性强、潜伏期长,且存在无症状感染者,因此,准确检测SARS-CoV-2对疫情防控至关重要。核酸检测技术在防控工作中发挥了举足轻重的作用,目前已开发出多种用于SARS-CoV-2核酸检测的方法,有些方法已被开发成试剂盒应用于临床检测。然而,这些方法原理各异,检测平台也不同,因此,选择合适的SARS-CoV-2核酸检测方法对疫情防控至关重要。本文介绍了目前核酸检测方法的原理与技术平台,比较了各方法的优缺点,明确了各类方法的应用范围,以期为选择合适的SARS-CoV-2核酸检测方法提供参考,对今后开发类似SARS-CoV-2的病原体检测方法提出展望。
关键词: 新型冠状病毒, 核酸检测, 技术原理, 评述